| 您当前的位置：首页 >>> 硕博论文 >>> 选种育种 >>> 三个畜禽品种成纤维细胞库构建及其生物学特性研究 |
采用组织块贴壁培养法,成功地构建了安格斯牛肾组织、丝羽乌骨鸡和白耳鸡鸡胚等三个畜禽品种成纤维细胞库。样本含量分别为20、59和57;细胞传代次数为3代;冻存管数分别为59支、157支和322支;每支冻存管中的细胞数量分别为5.88×106个细胞/ml,3.0×107个细胞/ml和1.7×107个细胞/ml。根据ATCC的细胞库鉴定内容与评价标准,对上述三个畜禽品种的成纤维细胞库进行了生物学性状研究、鉴定和综合评价,所得结果如下: 1.三个畜禽品种的成纤维细胞形态均为典型成纤维状,梭形或不规则三角形;生长时的细胞呈放射状、火焰状或旋涡状走形。镜下观察,细胞生长健康,形态良好。 2.三个畜禽品种的成纤维细胞复苏后,其生长曲线均呈“S”型,细胞经历了潜伏期、指数生长期和停滞期,符合细胞生长规律。冻存前存活率分别为95.8％,97.3％利96％;复苏后存活率分别为92.2％,91.4％和90.5％。复苏后细胞存活率有所下降,其主要原因是细胞在冷冻和复苏过程中遭受机械和化学作用所致。 3.三个畜禽品种成纤维细胞的细菌、真菌和支原体等微生物检测结果均呈阴性。 4.三个畜禽品种成纤维细胞的核型...更多分析结果分别为2n=60,78±和78±,均保持二倍体性状,遗传性能稳定,可以作为物种鉴别的依据。 5.三个畜禽品种成纤维细胞的LDH和MDH同工酶酶谱,LDH同工酶分别为5条,4条和4条;MDH同工酶分别为5条,2条和2条。两种同工酶酶谱均具种属特异性,细胞遗传性能稳定,表明未发生物种间细胞的交叉污染和恶性转化,可作为物种与品种分类的主要依据之一。 6.EGFP-N3和DsRed外源基因在三个畜禽品种成纤维细胞的表达率分别为:25.6％,41.5％和20％。对比试验表明:EGFP-N3和DsRed外源基因表达率与细胞生长汇合程度、脂质体包被质粒的浓度比例及转染时间直接相关。 7.三个畜禽品种成纤维细胞经醇类处理后使用PEG化学促融的方法,使畜禽品种间两两细胞融合。安格斯牛和丝羽乌骨鸡的细胞融合率为97.2％,安格斯牛自身细胞融合率为94.9％,丝羽乌骨鸡自身细胞融合率为92.4％。并从各个角度充分说明细胞发生融合。细胞融合技术在实际应用中特别是在单克隆抗体、抗肿瘤疫苗及动植物远缘杂交育种和微生物菌种选育,绘制基因图谱等方面具有十分重要的意义。 8.三个畜禽品种成纤维细胞的凋亡检测,凋亡率分别为1.2％,1.5％利0.9％。检测结果显示,构建的细胞库中的凋亡细胞数量很少,说明所构建细胞库中保存的细胞达到优质细胞标准。本试验是所建细胞库生物学特性研究的延续,为以后的深入研究提供了技术支撑。 本试验所构建的安格斯牛、丝羽乌骨鸡和白耳鸡三个畜禽品种的成纤维细胞库均达到ATCC的细胞库鉴定与评价标准。开辟了畜禽遗传资源在细胞水平上的长久保存的新途径,同时也为生命科学和动物克隆等研究提供宝贵材料。
三个畜禽品种成纤维细胞库构建及其生物学特性研究
英文缩略表11-12
第一章 绪论12-22
1.1 细胞培养技术发展概述12-13
1.2 动物细胞的培养方法13-15
1.2.1 贴壁培养法13
1.2.2 悬浮培养13-14
1.2.3 固定化培养14-15
1.3 动物细胞的应用15-16
1.3.1 生物学基础研究中的应用15
1.3.2 动物细胞产品的开发和应用15
1.3.3 临床医学方面的应用15-16
1.3.4 育种方面的应用16
1.4 所构建细胞库的生物学研究16-22
1.4.1 细胞形态学及活力检测16-17
1.4.2 细胞的微生物检测17-18
1.4.3 细胞遗传学特征18-19
1.4.4 基因转导19
1.4.5 细胞融合分析19-20
1.4.6 细胞凋亡分析20-22
第二章 细胞库构建及检测22-32
2.1 试验材料22-26
2.1.1 试验动物22-23
2.1.2 主要仪器设备23
2.1.3 主要试剂23
2.1.4 成纤维细胞培养试剂23-24
2.1.5 微生物检测试剂24
2.1.6 染色体标本制备所用试剂24-25
2.1.7 脂质体转染细胞所用试剂25
2.1.8 同工酶分析所用试剂25-26
2.1.9 细胞融合所用试剂26
2.1.10 细胞凋亡检测所用试剂26
2.2 试验方法26-32
2.2.1 细胞培养26-27
2.2.2 细胞库质量检测27-32
第三章 细胞库生物学特性研究结果32-58
3.1 细胞形态特征32-35
3.1.1 原代细胞的生长情况32-33
3.1.2 传代细胞的生长情况33-35
3.2 细胞的冻存与复苏35-37
3.3 细胞生物学检测37-58
3.3.1 细胞活力检测37-38
3.3.2 微生物检测38-42
3.3.3 遗传学检测42-50
&~bsp; 3.3.4 脂质体介导外源基因在细胞中的表达50-53
3.3.6 细胞融合分析53-55
3.3.7 细胞凋亡分析55-58
第四章 全文结论58-60
参考文献60-64
致谢64-65
作者简历65
|
|
|
|
|
